ELISA實(shí)驗(yàn)技巧：ELISA（雙抗體夾心法）檢測HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。

【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含：
1、包被抗-HBs反應(yīng)條
1瓶
2、酶結(jié)合物
1瓶
3、HBSAg陽性對照
1瓶
4、HBsAg陰性對照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋
1瓶
6、顯色劑(TMB)A
1瓶
7、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶

【方法】

1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。

【結(jié)果】

比色法:波長450nm，先用空白孔校零點(diǎn)，然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。
備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。陽性對照OD值≥0.8，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

【注意事項(xiàng)】
1、試劑盒置2℃～8℃保存。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。
4、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。
5、不同批號試劑請勿通用。
6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時，請置37℃至溶解。